色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，結(jié)合色譜及質(zhì)譜的技術(shù)，是目前分離和鑒定的重要的分析方法之一。其中液相色譜-質(zhì)譜儀應(yīng)用更為廣泛，液相色譜除了能分析一般的化合物，還能分析氣相色譜不能分析的強(qiáng)極性、熱不穩(wěn)定性、難揮發(fā)的化合物。液相色譜質(zhì)譜儀由色譜儀、接口、質(zhì)譜儀、電子系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)六大部分組成，是一種的檢測(cè)儀器，儀器的良好工作狀態(tài)是檢測(cè)準(zhǔn)確度的一個(gè)重要影響因子。為了保證儀器有一個(gè)良好的狀態(tài)，保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性，需要正確合理的使用和維護(hù)儀器。下面以液相色譜儀為例，從儀器進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜柱系統(tǒng)等各個(gè)系統(tǒng)的日常維護(hù)保養(yǎng)進(jìn)行詳細(xì)闡述，并對(duì)使用過(guò)程中容易遇到的問(wèn)題進(jìn)行分析，提出解決方法。
液相部分的維護(hù)
開(kāi)機(jī)注意事項(xiàng)
要求使用220?V單相交流電。如發(fā)生斷電，不管任何原因造成的，先關(guān)閉儀器面板左下角的開(kāi)關(guān)，等待供電恢復(fù)10分鐘以上再開(kāi)啟電源，否則有可能燒毀電路板。儀器運(yùn)行時(shí)需提供純度>99%的氮?dú)庾鳛閲婌F與干燥氣，輸出壓力為0.6～0.7?MPa。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前先檢查液氮罐液體存量是否充足。儀器開(kāi)機(jī)時(shí)，確認(rèn)電源已經(jīng)連接而且氣振閥處于關(guān)閉，打開(kāi)儀器總電源，隨后將前面板左下方的電源按鍵按下，真空泵即開(kāi)始工作。大約2～3分鐘后，儀器內(nèi)置的系統(tǒng)啟動(dòng)完畢，可以開(kāi)啟Mass hunter軟件與儀器通訊。等待四極桿溫度達(dá)到100℃，高真空達(dá)到4×10-5??Torr之后，即可進(jìn)行調(diào)諧或開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。在儀器開(kāi)始抽真空時(shí)，請(qǐng)不要打開(kāi)前級(jí)泵上的氣振閥，否則可能因?yàn)榛赜臀廴菊婵涨惑w內(nèi)部。
流動(dòng)相的要求
每次開(kāi)機(jī)前，保證超純水和流動(dòng)相的新鮮，泵的各個(gè)管路不應(yīng)余留上次殘留的溶劑。流動(dòng)相需符合HPLC與LC-MS要求等級(jí)，流動(dòng)相中盡量加易揮發(fā)的鹽，盡量不使用表面活性劑之類，否則容易導(dǎo)致離子抑制，表面活性劑產(chǎn)生的加合物和離子簇會(huì)干擾質(zhì)譜數(shù)據(jù)。如果遇到離子抑制，可以把樣品峰往后推或者改變提取方法，或者考慮用APCI源。盡量不使用無(wú)揮發(fā)性的緩沖劑，例如，磷酸緩沖劑等，磷酸鹽及其他不揮發(fā)緩沖鹽在離子源會(huì)沉淀并堵塞毛細(xì)管等。另外液質(zhì)不能承受過(guò)大流速。溶劑瓶避免陽(yáng)光直射。
樣品的要求
保證樣品的清潔，進(jìn)樣前盡量使用0.22?µm的濾膜濾過(guò)，避免樣品太臟而堵塞色譜柱或離子源的毛細(xì)管;樣品溶劑必須是色譜純，應(yīng)該和流動(dòng)相比例一致;進(jìn)樣濃度不宜太高，因?yàn)樘邼舛鹊臉悠啡菀孜廴眷`敏度高的儀器，進(jìn)而影響檢驗(yàn)結(jié)果。由于液質(zhì)的流速較小(ESI一般為0.2?mL/min)，所以配置樣品的溶劑強(qiáng)度不能太大，盡量小于起始比例，否則，會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間偏移、峰形扭曲等問(wèn)題。
進(jìn)樣系統(tǒng)的維護(hù)
對(duì)于液相色譜來(lái)說(shuō)，無(wú)論是手動(dòng)進(jìn)樣還是自動(dòng)進(jìn)樣，都是使用六通閥進(jìn)樣的。進(jìn)樣裝置要求：密封性好，死體積小，重復(fù)性好，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小樣。六通閥使用及維護(hù)注意事項(xiàng)：①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45?µm濾膜過(guò)濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過(guò)泵的限值壓力;再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過(guò)高的壓力將使柱頭損壞。③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通常可用水沖洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。注意：溶劑入口過(guò)濾芯為消耗品，尤其不可以使用超聲清洗，可以使用稀硝酸浸泡，然后用水沖洗至中性，以重復(fù)使用。
色譜柱系統(tǒng)的維護(hù)
在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題：①色譜柱的選擇會(huì)直接影響混合物中組分的分離，所以一定要選用合適的色譜柱，在使用新柱前要在自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來(lái)測(cè)定該色譜柱的柱效，并且在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。②柱子在使用過(guò)程中，不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng);避免壓力和溫度的急劇變化，機(jī)械震動(dòng)和溫度的突然變化都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行。③當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈，樣品前處理對(duì)于柱子使用壽命影響甚大，進(jìn)樣樣品要提純過(guò)濾并且嚴(yán)格控制進(jìn)樣量，可以使用保護(hù)柱。④注意色譜柱的pH值使用范圍，不能高溫下過(guò)長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵和相;每天分析工作結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱子。若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉。
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